水稻原位雜交測試服務-科銳諾(推薦商家)
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武漢科銳諾生物科技有限公司
- 主營業務:外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術服務
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- 公司地址:湖北省武漢市江夏區神墩四路666號武漢國英種子A棟1樓
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(王經理 先生)
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后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
原位雜交的預雜交:濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體,不洗。
雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專1用蓋玻片的保護膜揭開后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據雜交情況可以調節)。
雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,水稻原位雜交測試服務,重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。

多彩色熒光原位雜交(multicolorfluorescenceinsituhybridization,mFISH)。它用幾種不同顏色的熒光素單獨或者混合標記的探針進行原位雜交,能同時檢測多個基因,擴大了FISH技術的臨床應用。FISH技術目前主要應用于染色體和DNA水平上的病理診斷檢測。染色體FISH主要檢測染色體易位、缺失、重復、變異等;DNAFISH主要是檢測基因突變、擴增、易位、缺失。與原位雜交技術相比,FISH更加安全、快速,特異性好、定位準確。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世紀80年代末在性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非性分子細胞遺傳技術,以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導分子(reporter molecule)結合,雜交后再通過細胞化學過程連接上熒光染料[1,2].FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯的單與探針分子特異性結合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優點,不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎上又發展了多彩色熒光原位雜交技術和染色質纖維熒光原位雜交技術.

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