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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術服務
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| 先生： |
滴加FITC-TSA：滴加FITC-TSA試劑，避光室溫反應5min。后TBST洗3次×10min，PBS洗1次×5min。
DAPI復染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片1劑封片。
鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發波長330-380nm，發射波長420nm，發藍光；FAM(488)綠光激發波長465-495nm，發射波長515-555 nm，發綠光；CY3紅光激發波長510-560，發射波長590nm，發紅光。）
1、組織取材：組織取材應盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快，所以新鮮組織和培養細胞在30 min 內固定。
2、細胞組織固定目的與注意事項：
（1）保持細胞結構；
（2）大限度地保持細胞內DNA或RNA的水平；
（3）使探針易于進入細胞或組織。
常用的固定劑是多聚甲醛，與其它醛類固定劑不同，分子病理技術服務，多聚甲醛不會與蛋白質產生廣泛的交叉連接，因而不會影響探針穿透入細胞或組織。
癌組織原位雜交實驗步驟：
1. 將準備做原位雜交的樣本常規脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8μm。
2. 玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。
3. 石蠟切片經常規脫蠟至水。30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合，室溫5-10分鐘以滅活內源性酶。蒸餾水洗3次。
4. 暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶（1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻），37℃或室溫消化3--30分鐘（視標本新舊、厚薄自行調整）。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
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第4年
