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植物組織RNA原位雜交技術服務-科銳諾生物(在線咨詢)

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目前,我國已穩定開展的分子病理技術主要有顯色原位雜交、熒光原位雜交、PCR、熒光定量PCR、基因芯片和DNA測序技術。顯色原位雜交(chromogenicinsituhybridization,植物組織RNA原位雜交技術服務,CISH)技術是分子生物學、組織化學及細胞學相結合產生的一門新興技術,是利用核酸分子單鏈間堿基互補的原理,將地1高辛或生物素標記的外源核酸探針與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對,結合成雙鏈雜交分子,通過過氧化物酶或堿性磷酸酶的呈色反應將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。根據探針種類不同可分為DNA原位雜交和RNA原位雜交。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世紀80年代末在性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非性分子細胞遺傳技術,以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導分子(reporter molecule)結合,雜交后再通過細胞化學過程連接上熒光染料[1,2].FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯的單與探針分子特異性結合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優點,不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎上又發展了多彩色熒光原位雜交技術和染色質纖維熒光原位雜交技術.

原理

根據抗原反應和化學顯色原理,組織切片或細胞標本中的抗原先和一抗結合,再利用一抗與標記生物素、熒光素等的二抗進行反應,前者再用標記辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結合,后通過呈色反應或熒光來顯示細胞或組織中化學成分,在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內發生的抗原反應產物,從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學成分的分布和含量。

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