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染色體原位雜交檢測服務(wù)-武漢科銳諾生物(圖)

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滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗。

.滴加生物素化鼠抗地1高辛:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

滴加生物素化過氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。

DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。

.蘇1木素復(fù)染,充分水洗。

酒精脫水,二甲1苯透明,封片。

原理

根據(jù)抗原反應(yīng)和化學(xué)顯色原理,染色體原位雜交檢測服務(wù),組織切片或細胞標本中的抗原先和一抗結(jié)合,再利用一抗與標記生物素、熒光素等的二抗進行反應(yīng),前者再用標記辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結(jié)合,后通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細胞或組織中化學(xué)成分,在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。

多彩色熒光原位雜交(multicolorfluorescenceinsituhybridization,mFISH)。它用幾種不同顏色的熒光素單獨或者混合標記的探針進行原位雜交,能同時檢測多個基因,擴大了FISH技術(shù)的臨床應(yīng)用。FISH技術(shù)目前主要應(yīng)用于染色體和DNA水平上的病理診斷檢測。染色體FISH主要檢測染色體易位、缺失、重復(fù)、變異等;DNAFISH主要是檢測基因突變、擴增、易位、缺失。與原位雜交技術(shù)相比,F(xiàn)ISH更加安全、快速,特異性好、定位準確。

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