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RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。該技術(shù)是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細(xì)胞和組織內(nèi)RNA表達(dá)的一種原位雜交技術(shù)。其基本原理是:在細(xì)胞或組織結(jié)構(gòu)保持不變的條件下,熒光原位雜交,用標(biāo)記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對原則,染色體原位雜交,與待測細(xì)胞或組織中相應(yīng)的基因片段相結(jié)合(雜交),所形成的雜交體(Hybrids)經(jīng)顯色反應(yīng)后在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位雜交技術(shù)經(jīng)不斷改進,其應(yīng)用的領(lǐng)域已遠(yuǎn)超出DNA原位雜交技術(shù)。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已成為有效的分子病理學(xué)技術(shù),原位雜交檢測,同時在分析低豐度和罕見的mRNA表達(dá)方面已展示了分子生物學(xué)的一重要方向。

原位雜交技術(shù)在其他生物領(lǐng)域也有廣泛的應(yīng)用,例如:

動物行為學(xué)研究:在動物行為學(xué)中,原位雜交技術(shù)可以用于檢測動物行為與基因表達(dá)之間的關(guān)系。例如,通過比較不同行為狀態(tài)下動物腦組織中基因表達(dá)的差異,原位雜交,可以揭示特定基因?qū)游镄袨榈挠绊憽?/p>

生物技術(shù)應(yīng)用:原位雜交技術(shù)在生物技術(shù)領(lǐng)域也有廣泛應(yīng)用,例如在基因、基因編輯和開發(fā)等方面。例如,通過原位雜交技術(shù)可以定位和特定基因,為基因和基因編輯提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和工具。

雜交 (1) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉(zhuǎn)到200ml預(yù)洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養(yǎng)箱內(nèi)的旋轉(zhuǎn)平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應(yīng)緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預(yù)洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細(xì)菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。(4) 將濾膜轉(zhuǎn)到盛有150ml預(yù)雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時用42℃)下,預(yù)雜交1-2小時。

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