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FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質(zhì)標(biāo)記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發(fā)明,現(xiàn)已從實(shí)驗(yàn)室逐步進(jìn)入臨床診斷領(lǐng)域。基本原理是熒光標(biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性;通過(guò)熒光顯微鏡觀察熒光信號(hào)可在不改變被分析對(duì)象(即維持其原位)的前提下對(duì)靶核酸進(jìn)行分析。DNA熒光標(biāo)記探針是其中常用的一類(lèi)核酸探針。利用此探針可對(duì)組織、細(xì)胞或染色體中的DNA進(jìn)行染色體及基因水平 的分析。熒光標(biāo)記探針不對(duì)環(huán)境構(gòu)成污染,靈敏度能得到保障,可進(jìn)行多色觀察分析,因而可同時(shí)使用多個(gè)探針,縮 短因單個(gè)探針?lè)珠_(kāi)使用導(dǎo)致的周期過(guò)程和技術(shù)障礙。

和其它實(shí)驗(yàn)方法一樣,必須同時(shí)設(shè)對(duì)照試驗(yàn)以證明其實(shí)驗(yàn)結(jié)果特異性。對(duì)照試驗(yàn)的設(shè)置須根據(jù)核酸探針和靶核苷酸的種類(lèi)和現(xiàn)有的可能條件去選定。ISHH的優(yōu)點(diǎn)是它的高度特異性,它可測(cè)定組織、培養(yǎng)的單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞提取物中的核苷酸含量。應(yīng)用高敏感度的性標(biāo)記cRNA探針在理想的ISHH的實(shí)驗(yàn)條件下檢測(cè)mRNA,其敏感度可達(dá)到20個(gè)mRNA拷貝/每個(gè)細(xì)胞。由于雙鏈DNA的穩(wěn)定性,在用ISHH定位DNA時(shí)很少發(fā)生丟失,降解,染色體原位雜交,其敏感性高到能夠顯示在染色體鋪片上,有時(shí)甚至在組織切片上的單個(gè)基因拷貝。正因?yàn)槿绱耍瑢?duì)ISHH結(jié)果的解釋?xiě)?yīng)持慎重態(tài)度,特別是前人未報(bào)告過(guò)的新發(fā)現(xiàn)。

原位雜交技術(shù)是一種在生物組織或細(xì)胞中定位DNA片段或RNA序列的重要生物技術(shù),具有廣泛的應(yīng)用前景。該技術(shù)在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)和工業(yè)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用,可以幫助人們深入理解基因表達(dá)和遺傳特征,為疾病的診斷和、品種的鑒定和遺傳育種以及產(chǎn)品安全性和穩(wěn)定性的檢測(cè)提供有效手段。隨著科技的不斷發(fā)展,原位雜交技術(shù)的應(yīng)用前景將更加廣闊,為生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的研究提供更多可能性。

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