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武漢科銳諾生物科技有限公司
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水稻種子是人類重要的食物來源，其發育涉及一個復雜的調控網絡，其中轉錄因子發揮了關鍵作用。MADS轉錄因子家族成員是植物花器1官發育的重要調控因子，已有的研究表明，幾乎所有的水稻MADS基因都在種子中表達，但對MADS家族成員參與水稻種子發育調控的研究結果仍比較少。
在這項研究中，研究組基于前期的表達譜研究基礎，分析得到了一個在水稻生殖發育階段優先表達的轉錄因子MADS29。細致分析表明，MADS29在花藥、胚珠和種子中均表達，且在受精后的母體組織表達量高。MADS29的反義轉1基因植株呈現種子皺縮、淀粉粒形態異常、灌漿速率下降等表型。通過解剖學切片、末端轉移酶標記實驗和全基因組表達譜芯片分析等，研究人員證明了MADS29通過調控程序化死1亡(PCD)過程促進珠心細胞和珠心突起處的降解。進一步的體外凝膠阻滯實驗顯示，MADS29能夠通過直接結合程序化死1亡相關基因的啟動子區域而調控其表達，進而影響胚乳發育。
癌組織原位雜交實驗步驟：
1. 將準備做原位雜交的樣本常規脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8μm。
2. 玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。
3. 石蠟切片經常規脫蠟至水。30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合，室溫5-10分鐘以滅活內源性酶。蒸餾水洗3次。
4. 暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶（1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻），37℃或室溫消化3--30分鐘（視標本新舊、厚薄自行調整）。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
原位雜交雜交液注意事項：
（1）雜交液內除含一定濃度的標記探針外，還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。
（2）雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加，可以減低探針與組織標本之間的靜電結合。甲酰胺可使Tm降低，雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA：RNA，RNA：DNA，DNA：DNA的雜交溫度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以雜交液中加入適量的甲酰胺，可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態結構的破壞以及標本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結合，從而減少雜交液的有效容積，植物染色體原位雜交檢測服務，提高探針有效濃度，以達到提高雜交率的目的（尤其對雙鏈核酸探針）。
在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等，都是為了阻斷探針與組織結構成分之間的非特異性結合，以減低背景。
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第4年
