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 滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗。

  .滴加生物素化鼠抗地1高辛:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

滴加生物素化過氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。

DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。

.蘇1木素復染,充分水洗。

酒精脫水,tunel技術服務,二甲1苯透明,封片。

原位雜交(in situ hybridization)將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交。使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內RNA表達的一種原位雜交技術。其基本原理是:在細胞或組織結構保持不變的條件下,用標記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對原則,與待測細胞或組織中相應的基因片段相結合(雜交),所形成的雜交體 (Hybrids)經顯色反應后在光學顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細胞內相應的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位雜交技術 經不斷改進,其應用的領域已遠超出DNA原位雜交技術。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已 成為有效的分子病理學技術,同時在分析低豐度和罕見的mRNA表達方面已展示了分子生物學的一重要方向。

近年來基因檢測在結1核病診斷中應用越來越廣泛,但主要應用于痰液等新鮮標本,在石蠟包埋組織標本中應用非常少。我們建立了利用熒光定量PCR及膜探針雜交法鑒別診斷結1核病與非結1核分枝桿1菌病的分子病理檢測方法;建立了利用高分辨溶解曲線法檢測1線抗結1核核1心藥1物利福平及異煙肼的耐藥情況的分子病理檢測方法。我們在首都臨床醫(yī)學發(fā)展專項的資助下進行大樣本臨床驗證。這些方法也將陸續(xù)轉化為我院分子病理診斷項目。

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