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雜交 (1) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,染色體原位雜交,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養箱內的旋轉平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。(4) 將濾膜轉到盛有150ml預雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時用42℃)下,預雜交1-2小時。

FISH是原位雜交技術大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質標記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發明,現已從實驗室逐步進入臨床診斷領域。基本原理是熒光標記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標記探針不對環境構成污染,靈敏度能得到保障,可進行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮 短因單個探針分開使用導致的周期過程和技術障礙。

植物組織原位雜交技術在植物基因表達和調控研究中具有廣泛的應用。它可以用來研究植物發育、生長、逆境響應等方面的基因表達模式和調控機制。例如,可以利用該技術研究植物中的轉錄因子、信號轉導通路、代謝途徑等基因的表達和調控。此外,植物組織原位雜交技術還可以用來鑒定植物中的病原體、檢測植物等方面。

總之植物組織原位雜交技術是一種重要的分子生物學技術,可以用來研究植物基因的表達和調控。它具有操作簡便、結果可靠、應用廣泛等優點,是植物分子生物學研究中不可或缺的工具。

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