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原位雜交第三天

1)        用1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換溶液,放置搖床上25分鐘,然后用1mlMABT置換,原位雜交,25分鐘,再用1mlMABT溶液置換,一小時(shí)以上,后用1mlMABT溶液置換,25分鐘。

2)        用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分鐘。

3)將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中,吸去staining buffer,原位雜交服務(wù),加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上錫箔紙以避光,避免搖動(dòng),室溫下顯色。

4)每隔一小時(shí)觀察胚胎是否開始顯色

5)將顯色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定,原位雜交技術(shù),拍照。

6)4C冰箱保存。

原位雜交技術(shù)是在一定的溫度和離子濃度下,使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補(bǔ)規(guī)則與組織細(xì)胞內(nèi)待測的核酸復(fù)性結(jié)合而使得組織細(xì)胞中的特異性核酸得到定位,并通過探針上所標(biāo)記的檢測系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來。經(jīng)特定標(biāo)記的核苷酸鏈為探針,可與組織切片、細(xì)胞或染色體標(biāo)本中的待檢DNA片段或mRNA進(jìn)行雜交,然后顯示標(biāo)記物,從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項(xiàng)技術(shù)可研究各種基因在染色體上的定位,原位雜交技術(shù)服務(wù),編碼某種蛋白質(zhì)的mRNA在胞質(zhì)中的表達(dá)。

原位雜交技術(shù)方法大致可分為:1.雜交前準(zhǔn)備,包括固定、取材、玻片和組織的處理,如何增強(qiáng)核酸探針的穿透性、減低背景染色等;2.雜交;3.雜交后處理;4.顯示(visualization):包括性自顯影和非性標(biāo)記的顯色。固定原位雜交組織化學(xué)技術(shù)在固定劑的應(yīng)用和選擇上應(yīng)兼顧到三個(gè)方面:保持細(xì)胞結(jié)構(gòu),限度地保持細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA的水平;使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或組織。DNA是比較穩(wěn)定的,mRNA是相對(duì)穩(wěn)定的但易為酶合成和降解。RNA卻絕然不同,非常容易被降解。因此,對(duì)于DNA的定位來說,固定劑的種類和濃度并不十分重要。相反,在RNA的定位上,如果要使RNA的降解減少到低限度,那么,不僅固定劑的種類濃度和固定的時(shí)間十分重要,而且取材后應(yīng)盡快予以冷凍或固定。

原位雜交-原位雜交技術(shù)服務(wù)-貝科新肽(推薦商家)由武漢貝科新肽科技有限公司提供。武漢貝科新肽科技有限公司實(shí)力不俗,信譽(yù)可靠,在湖北 武漢 的化學(xué)試劑等行業(yè)積累了大批忠誠的客戶。貝科新肽帶著精益求精的工作態(tài)度和不斷的完善創(chuàng)新理念和您攜手步入輝煌,共創(chuàng)美好未來!

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